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(1)待平板冷凝后,要将平板倒置,其主要原因是防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染.(2)在培养基上接种时划线的顺序依次是每一区的划线应从前一区划线的末端位置开始划线 ,从而能将菌种逐区减少,所以划线顺序是①③②;培养后菌落分布不均匀可能是接种时涂布不均匀造成的.
(3)利用选择培养基选择培养时,培养基中若仅以木糖为碳源 ,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌不能利用木糖发酵.
(4)PCR?技术大量扩增目的基因时 ,缓冲液中需要加入的引物个数计算公式为2n+1-2,所以若将1个目的基因分子复制10?次,则需要在缓冲液中至少加入211-2=个引物 ,质粒中的标记基因作用是用于筛选含目的基因的受体细胞,将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上,然后将所得的重组质粒导入酵母菌时,应选择缺乏尿嘧啶合成能力的酿酒酵母作为受体菌.若选择培养基中的酵母菌能合成尿嘧啶 ,则说明目的基因导入受体酵母菌中.
(5)基因工程是为了培养能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母,所以检测时应将培育获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试,随着发酵的持续进行 ,若该酿酒酵母能够存活,说明它能利用葡萄糖和木糖产生酒精,且对酒精的难受能力强 ,即说明所需菌株培育成功.
故答案为:(1)防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染
(2)①③②涂布不均匀
(3)木糖?
(4)211-2?尿嘧啶合成
(5)葡萄糖和木糖?利用葡萄糖和木糖产生酒精,且对酒精的难受能力强(合理即可)
琼脂平板水蒸气怎么处理
培养大肠杆菌
复苏:
配制LB固体培养基,高压蒸汽灭菌 ,倒平板。
挑取菌种,在培养基上划线 。
37℃培养24h至长出菌落。
摇菌
配制LB液体培养基。高压蒸汽灭菌 。
无菌试管内加入3ml LB培养基,挑取单菌落加入培养基中 ,37℃,200rpm摇菌过夜。
扩大培养:
配制LB液体培养基。高压蒸汽灭菌 。
三角瓶中加入50ml液体LB培养基,加入1ml菌液,37℃ ,200rpm摇菌至所需OD值。
注:培养基内需加入菌株所具有抗性的抗生素。
工具:超净工作台、酒精灯 、接种针、试管、高压灭菌锅 、培养皿等 。
注意无菌操作。
培养幽门螺杆菌
用于培养的胃粘膜活检标本应置于生理盐水、营养肉汤或20%葡萄糖中,然后立即转送到细菌室培养。如果标本不能在4个小时内培养,就应放在4摄氏度保存 ,但不宜超过24小时 。长期保存用于培养的活检标本的唯一方法是将其置于-70摄氏度或液氮之中。
培养幽门螺杆菌的培养基包括非选择性及选择性两种。常用的非选择性培养基基础为脑心浸液琼脂、哥伦比亚琼脂 、胰蛋白胨大豆琼脂以及Wilkins-Chalgren琼脂。培养基中需加7%-10%的去纤维蛋白马血 。羊血、人血、马血清 、氯化血红素、淀粉、胆固醇或环糊精(cyclodextrins) 也可代替马血。选择培养基则是在上述 培养基中添加一定的抗菌药物,如万古霉素 、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B以及甲氧苄氨嘧啶(TMP)。
常用的有Skirrow 配方及Dent 配方 。前者原用于弯曲菌的培养,亦可用于幽门螺杆菌培养。后者为前者的改良 ,即将多粘菌素用头孢磺啶取代,因为少数(5%左右)幽门螺杆菌菌株对多粘菌素敏感。Drnt配方为万古霉素(10mg/L)、头孢磺啶(5mg/L) 、TMP(5mg/L)以及二性霉素B(5mg/L) 。有报道指出,部分菌株对啶酸敏感 ,因而培养基中应尽量避免作用该抗生素。
1、未接种平板的琼脂培养基内部的水分蒸发,会在培养皿盖等处凝结水蒸气。这种情况下,可以采取将培养皿放入冰箱 ,降低培养基的温度,从而减缓水分蒸发,避免水蒸气凝结 。
2、已接种的平板,由于培养基表面或内部可能存在微生物的呼吸作用等代谢活动 ,这些活动会产生水并使培养基内部的温度升高,从而导致水分蒸发并在培养皿盖等处凝结成水蒸气。这种情况下,采取降低环境湿度 ,或者在接种菌体后的培养过程中,定期倒置平板以防止水蒸气凝结。
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